β-內(nèi)酰胺類藥物最大允許殘留限量

時間：2023-03-25 07:28:50來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

β-內(nèi)酰胺類藥物最大允許殘留限量

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

5.1.3最大允許殘留限量：

β-內(nèi)酰胺類藥物是一類非常重要的抗菌藥物，在人醫(yī)和獸醫(yī)上應(yīng)用十分廣泛。由于過敏反應(yīng)和細(xì)菌耐藥性等原因，許多國家都對該類藥物在動物上的使用以及在動物源食品中的殘留進行了嚴(yán)格的監(jiān)控。歐盟、美國、日本等國家和地區(qū)都制定了牛奶、肌肉和腎臟等動物源食品中該類藥物的最大允許殘留限量(maximum residue limit，MRL)，我國農(nóng)業(yè)部235號公告也對其MRL做了嚴(yán)格規(guī)定。世界主要國家和地區(qū)規(guī)定的β-內(nèi)酰胺類藥物的MRLs見表5-3。

5.1.4殘留分析技術(shù)

5.1.4.1前處理方法

(1)提取方法

β-內(nèi)酰胺類藥物屬于酸性、極性化合物，目前報道的提取方法主要為液液萃取(LLE)，常用的提取溶液主要有水、有機溶劑、酸性緩沖溶液以及混合溶液(水、酸和有機溶劑中的兩種或三種以一定比例混合配制)等。為了防止該類藥物與動物組織中的大分子化合物形成共價鍵，樣品提取后要進行蛋白沉淀，常用的脫蛋白試劑有甲醇、乙腈、2-丙醇、硫酸、鎢酸鈉、酸化乙腈(pH4.0～4.4)等，以達到同時去除蛋白質(zhì)和萃取β-內(nèi)酰胺類藥物的目的。但是青霉素G、氨芐青霉素、羥氨芐青霉素等藥物不耐酸，在酸性條件下易分解，因此提取液中加入酸性溶液時，應(yīng)防止該類β-內(nèi)酰胺類化合物發(fā)生水解。

1)水提取

我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18932.25-2005建立了檢測蜂蜜中青霉素G、青霉素V、乙氧萘青霉素、苯唑青霉素、鄰氯青霉素、雙氰青霉素殘留量的測定方法。樣品加入去離子水進行提取，經(jīng)液體混勻器進行快速混合，完全溶解樣品。然后經(jīng)HLB固相萃取柱進行凈化，甲醇洗脫，收集洗脫液氮氣吹干，乙腈復(fù)溶后，進行液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)測定。該方法測得6種PENs藥物的平均回收率為86.1%～94.3%；青霉素G、青霉素V、苯唑青霉素的檢出限(LOD)為1.0ug/kg，鄰氯青霉素、雙氯青霉素的LOD為2.0μg/kg，乙氧萘青霉素的LOD為0.5μg/kg。Goto等采用電噴霧電離(ESI)質(zhì)譜選擇性反應(yīng)監(jiān)測(SRM)模式高通量分析動物組織(牛和豬肌肉、肝臟和腎臟)中的PENs殘留。取5g樣品加入5mL超純水后，經(jīng)高速混勻器混合，離心后經(jīng)超濾器進行凈化，超濾器經(jīng)1%吐溫-20和超純水沖洗，然后離心收集超濾液(13000r/min，20℃，30min)，超濾液直接進行分析。藥物在0.05、1ppm添加濃度水平回收率為70%～115%，變異系數(shù)(CV)為0.7%～14.8%，LOD為0.002ppm。

表5-3 主要國家和地區(qū)規(guī)定的β-內(nèi)酰胺類藥物的MRLs

2)酸性溶液提取

趙軍等建立了--種在同一個色譜體系下同時測定生物樣品中頭孢拉定、頭孢氨芐、頭孢克洛、氨芐青霉素、阿莫西林等5種β-內(nèi)酰胺類抗生素的高效液相色譜(HPLC)方法。血清樣品按1：1(體積比)加入6%三氯乙酸溶液沉淀蛋白，然后離心取上清液定容后，進樣分析。尿樣以1：100(體積比)稀釋后直接進HPLC分析。5種抗生素可在20min內(nèi)分離；LOD可達到0.12～0.35ug/mL；在血清中的回收率均大于94.6%，在尿樣中的回收率大于88.3%。羅道栩等采用75%的三氯乙酸溶液沉淀牛奶中的蛋白質(zhì)，并提取氨芐青霉素殘留，在酸性條件下，提取液中的氨芐青霉素與甲醛加熱生產(chǎn)2-羥基-3-苯基-6-甲基吡嗪(氨芐青霉素?zé)晒庋苌?，用帶有熒光檢測器(FLD)的HPLC在激發(fā)波長346nm，發(fā)射波長420nm條件下測定該衍生物，外標(biāo)法定量。方法LOD為1ug/L，定量限(LOQ)為2μg/L，回收率為70%～110%，批內(nèi)CV小于10%，批間CV小于15%。Santos等建立了一種檢測牛奶中6種抗生素(包括氨芐西林、阿莫西林、氯唑西林、青霉素)殘留的毛細(xì)管電泳(CE)方法。牛奶樣品用20%三氯乙酸溶液沉淀蛋白，混合液渦動混勻，4000r/min離心10min，收集上清液，0.4um濾膜過濾，C18固相萃取柱凈化以后，進行CE分離。6種抗生素在2.5ug/mL、5μg/mL添加濃度水平平均回收率大于72%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于5%。

Ang等采用HPLC-FLD檢測鯰魚和鮭魚組織中阿莫西林殘留。樣品先用磷酸緩沖液(pH4.5)提取，然后用三氯乙酸溶液沉淀鯰魚和鮭魚中的蛋白質(zhì)，C18固相萃取柱凈化后，液液分配除去非極性干擾物。提取液與甲醇和三氯乙酸在100℃反應(yīng)30min，熒光衍生物經(jīng)醚提取，濃縮，HPLC檢測。鯰魚組織中阿莫西林在2.5～20ppb添加濃度范圍內(nèi)平均回收率大于80%，鮭魚組織中阿莫西林平均回收率大于75%，CV小于6%；鯰魚組織中阿莫西林的LOD和LOQ分別為0.5ppb、1.2ppb；鮭魚組織中的LOD和LOQ分別為0.8ppb、2.0ppb。Boison等建立了一種改進的方法檢測動物組織中青霉素G殘留。組織樣品用水提取，提取液用鎢酸鈉、硫酸沉淀蛋白，然后經(jīng)C18固相萃取柱凈化。青霉素V和芐青霉素用1mL 60%乙腈-35%水-5% 0.2moL/L磷酸鹽緩沖液洗脫，加入1mL 1，2，4三唑氯化汞溶液進行衍生化，65℃反應(yīng)30min。該方法對萃取牛奶中的青霉素效果非常好，使用該方法，樣品中的蛋白質(zhì)通常會變性，留在液液界面。該方法測得肝臟、腎臟和肌肉組織中青霉素G的LOD為5Hg/kg。

3)有機溶劑提取

黃百芬等建立了一種用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)快速測定牛奶中6種PENs殘留的方法。吸取5mL牛奶樣品于50mL離心管中，搖勻，加入5mL乙腈，渦流混合60s，再加入10mL乙腈渦流，1800r/min離心5min，取10mL上清液，用氮氣吹干，加入3mL磷酸鹽緩沖液(pH4.5)，渦流15s，經(jīng)HLB柱凈化和0.3um微孔濾膜過濾后，用LC-MS/MS測定。6種PENs的LOD為0.02～0.19ng/mL；在0.2～2.0ng/mL線性范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.991，回收率大于90%，方法精密度為4.87%。

4)混合溶液提取

Mastovska等以乙腈-水(4+1，v/v)提取牛腎臟中β-內(nèi)酰胺類抗生素，再用C18柱進行固相萃取凈化，建立了11種β-內(nèi)酰胺類抗生素(阿莫西林、氨芐西林、頭孢唑林、頭孢氨芐、氯唑西林、頭孢噻呋DCCD、脫乙酰頭孢匹林、雙氯青霉素、乙氧萘青霉素、苯唑西林、青霉素G)的LC-MS/MS檢測方法。除頭孢噻呋DCCD平均回收率為60%外，其他β-內(nèi)酰胺類抗生素的平均回收率為87%～103%。Lihl等采用乙腈-0.1moL/L磷酸鹽溶液(4+1，v/v)提取牛肌肉組織中青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林和雙氯西林，再用二氯甲烷液液分配凈化，經(jīng)過自動固相萃取凈化后，用HPLC-光化學(xué)降解-電化學(xué)檢測器(ECD)檢測。該方法測得PENs的平均回收率為60%～103%，CV為6%～11%。

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