碳源和酶試驗(yàn)

時(shí)間：2023-03-25 14:11:12來源：food欄目：食品快速檢測(cè) 閱讀：

碳源和酶試驗(yàn)

[db:作者] / 2022-11-29 00:00

碳源利用試驗(yàn)

有的細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，能利用枸櫞酸鹽為碳源，因此，能在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并分解構(gòu)櫞酸鹽使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。培養(yǎng)基中的溴麝香草繼豬示劑由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。不能利用枸櫞酸鹽為碳源的細(xì)菌，在該培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，培養(yǎng)基不變色。碳源利用試驗(yàn)用于腸桿菌種中菌屬間的鑒定，埃希氏菌屬、志賀氏菌屬、愛德華氏菌屬、摩根氏菌屬為陰性，其他菌屬多為陽(yáng)性。

酶試驗(yàn)

1.硝酸鹽還原試驗(yàn)有些細(xì)菌具有還原硝酸鹽的能力，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨或氮?dú)獾?。亞硝酸鹽的存在可用硝酸試劑檢驗(yàn)。

試驗(yàn)方法：將磺胺酸冰醋酸溶液和a-萘胺乙醇溶液各0.2mL等量混合，取混合試劑約0.1ml加于液體培養(yǎng)物或瓊脂斜面培養(yǎng)物表面，10min內(nèi)呈現(xiàn)紅色即為陽(yáng)性。

用a-萘胺進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)生的紅色消退得很快，加入后應(yīng)立即判定結(jié)果。進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)必須有未接種的培養(yǎng)基管作為陰性對(duì)照。a-萘胺具有致癌性，使用時(shí)應(yīng)加注意。

2.尿素酶試驗(yàn)有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解產(chǎn)生2個(gè)分子的氨，使培養(yǎng)基pH升高，酚紅指示劑變紅，見彩圖3。

試驗(yàn)方法：挑取待測(cè)菌接種于液體培養(yǎng)基中，搖勻，于(36±1)℃培養(yǎng)10min、60min和120min，分別觀察結(jié)果；或涂布并穿刺接種于瓊脂斜面，不要到達(dá)底部，留底部作變色對(duì)照。培養(yǎng)2h、4h和24h分別觀察結(jié)果，如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至第4天作最終判定。

3.氧化酶試驗(yàn)氧化酶即細(xì)胞色素氧化酶，氧化酶先使細(xì)胞色素c氧化，然后此氧化型細(xì)胞色素c再使對(duì)苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。

試驗(yàn)方法：在瓊脂斜面培養(yǎng)物上或瓊脂平板菌落上滴加試劑1～2滴，或用接種環(huán)將菌落涂布在氧化酶試紙上，陽(yáng)性30s內(nèi)變藍(lán)色，陰性者無顏色改變。注意避免含鐵物質(zhì)。

4.明膠液化試驗(yàn)有些細(xì)菌具有明膠酶(亦稱類蛋白水解酶)，能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步水解為氨基酸，失去凝膠性質(zhì)而液化。

試驗(yàn)方法：挑取18～24h培養(yǎng)物，以較大量穿刺接種于明膠高層約2/3深度或點(diǎn)種于平板培養(yǎng)基。于20～22℃培養(yǎng)7～14d。明膠高層亦可培養(yǎng)于(36±1)℃。每天觀察結(jié)果，若因培養(yǎng)溫度高而使明膠本身液化時(shí)應(yīng)不加搖動(dòng)，靜置冰箱中待其凝固后，再觀察其是否被細(xì)菌液化，如確定被液化，即為試驗(yàn)陽(yáng)性。平板試驗(yàn)結(jié)果的觀察為在培養(yǎng)基平板點(diǎn)種的菌落上滴加試劑，若為陽(yáng)性，10～20min后，菌落周圍應(yīng)出現(xiàn)清晰帶環(huán)。否則為陰性。

5.凝固酶試驗(yàn)致病性葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：一種是結(jié)合凝固酶，結(jié)合在細(xì)胞壁上，使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白而附著于細(xì)菌表面，發(fā)生凝集，可用玻片法測(cè)出；另一種是分泌至菌體外的游離凝固酶。作用類似凝血酶原物質(zhì)，可被血漿中的協(xié)同因子激活變?yōu)槟笜游镔|(zhì)，而使纖維蛋白原變成纖維蛋白，從而使血漿凝固，可用試管法測(cè)出。

文章來源：《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)》

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