原料乳及乳制品中三聚氰胺的測定（二）

時間：2023-03-25 16:08:05來源：food欄目：食品快速檢測閱讀：

原料乳及乳制品中三聚氰胺的測定（二）

小編 / 2022-10-18 17:04

　　5.操作步驟

(1)樣品提取稱取2g(精確至0.01g)試樣于50mL具塞塑料離心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超聲提取10min，再振蕩提取10min后，以不低于4000r/min離心10min。上清液經(jīng)三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL濾液，加入5mL水混勻后作待凈化液。

　　注：若樣品中脂肪含量較高，可以用三氯乙酸溶液飽和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱凈化。

(2)樣品凈化固相萃取柱中事先加入3mL甲醇和3mL水通過小柱調(diào)整，流出液棄去，然后加入稀釋后的待凈化液，待全部樣品經(jīng)過小柱后，再依次用3mL水和3mL甲醇洗滌固相萃取柱，抽至近干后，向固相萃取柱中加入6mL氨化甲醇溶液洗脫，收集洗脫液于50℃下用氮?dú)獯蹈?，殘留?相當(dāng)于0.4g樣品)用1mL流動相定容，旋渦混合1min，過微孔濾膜后，供測定。

　　(3)液相色譜儀測定

　　①儀器條件

色譜柱：C8柱，250mm×4.6mm(i.d.)，5um，或相當(dāng)者;C18柱，250mm×4.6mm(i.d.)，5um，或相當(dāng)者。流動相：C8柱，離子對試劑緩沖液-乙腈(85+15，體積比)，混勻;C18柱，離子對試劑緩沖液-乙腈(90+10，體積比)，混勻。流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;測定波長：240nm;進(jìn)樣量：20uL。

　?、跇?biāo)準(zhǔn)線性：用流動相將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋得到的濃度為0.8，2，20，40，80ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，濃度由低到高進(jìn)樣檢測，以峰面積-濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。

③定量測定：待測樣液中三聚氰胺的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。

　　6.結(jié)果計算

　　試樣中三聚氰胺的含量由色譜數(shù)據(jù)處理軟件或按下式計算獲得。

　　式中x——試樣中三聚氰胺的含量，mg/kg

A——樣液中三聚氰胺的峰面積，cm2

　　p——標(biāo)準(zhǔn)溶液中三聚氰胺的濃度，ug/mL

　　V——樣液最終定容體積，mL

　　As——標(biāo)準(zhǔn)溶液中三聚氰胺的峰面積，cm2

　　m——試樣的質(zhì)量，g

　　f——稀釋倍數(shù)

　　7.要點(diǎn)提示

(1)固相萃取柱流速不可過快，否則影響凈化效果，一般控制在1～2滴/s為宜。

　　(2)必要時應(yīng)添加回收質(zhì)控樣品以監(jiān)控檢測質(zhì)量，一般控制回收率在80%～120%為宜，陽性樣品應(yīng)使用回收率校正后報告結(jié)果。

(3)C18、C8色譜柱屬于反相柱，柱管內(nèi)充滿有機(jī)溶劑，檢測樣品前，應(yīng)用10倍柱體積的流動相沖洗色譜柱;檢測完畢后，使用乙腈-水(20+80)的流動相以1mL/min的流速沖洗色譜柱20～30min，再用10～20倍柱體積的甲醇或乙腈將柱管內(nèi)的流動相置換出來，使其保存在有機(jī)相中以保證其可靠的色譜性能。

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